何为精子细胞毒试验

抗精子抗体与精子结合后，在补体参与下，可导致精子制动和死亡，利用台盼蓝或伊红Y 等染料使死精子染色，间接验证血清或分泌液中是否有制动精子的抗体存在。

(一)台盼蓝染色法

【准备】

(1)待检血清的分离和灭活补体。

(2)AB 血型人血清(补体)制备。

(3)2% 台盼蓝液配制(用蒸馏水)。

(4)台盼蓝-生理盐水溶液配制：取适量生理盐水，加等体积 2% 台盼蓝水溶液，混匀即可。

(5)配制 0.01 mol/L，pH 7.4 PBS 溶液。

【方法】

(1)取正常新鲜精液[精子浓度为(40～ 100)× 106/mL]用 pH 7.4 PBS作 1∶10 稀释，以500r/min 30min离心洗涤一次，弃去上清，沉渣用 PBS调整精子浓度为 100× 106/mL 的精子悬液。

(2)在小试管内加入 1滴待检血清，1滴精子悬液和 2滴补体血清。置 37℃ 孵育，并于30min、60min分别追加 2滴补体血清，直至 90min后加入 1滴台盼蓝生理盐水溶液，继续孵育 60min，取出小试管，以 500 r/min，30min离心，弃去上清，将沉渣涂片，待干燥后镜下观察。以阴性血清作对照组，以同样条件和方法处理。

(3)计数：对照组：记录数至 100个无染色精子(活精子)时所需的总精子数(含 100个无染色精子加一定数量染色的死精子)。实验组：记录对照组相应的总精子数，把其中所含的无染色精子(活精子)数作 X。将 100- X 所得的数目，即为被检血致死的精子数，这个数目称为精子毒性指数(STI)。

【判断】

(1)STI>25时，P≤0.01，判为阳性。

(2)STI在 15～ 20之间，判为可疑。

(3)STI<15时，判为阴性。

本法所得阳性率与精子制动试验的阳性率较为一致。

(二)伊红 Y 染色法

【准备】

(1)用蒸馏水配制 4% 伊红 Y 染液。

(2)配制 0.01mol/L，pH 7.4 PBS溶液。

【方法】

(1)取正常新鲜精液(精子浓度宜大于：60×106/mL)，用 pH 7.4 的 PBS洗涤 3次，调整精子浓度为 10×107/mL。