间接荧光抗体试验如何测精子抗体
2012-05-01 08:30:01
将已知抗原(精子)与第一抗体(待检血清)结合后，再与经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的第二抗体结合后，在荧光显微镜下，可见绿色荧光，从而判定患者血清中是否存在抗精子抗体。
【试剂】
(1)0.01mol/L pH 7.4 磷酸缓冲液(PBS)。
(2)甲醇(分析纯)。
(3)羊抗人 IgG-FITC。
【方法】
(1)取正常男性精液，自然液化。
(2)PBS离心洗涤 3次，往除精浆，调精子浓度为 5×104/mL。
(3)精子悬液涂片，室温自然干燥。
(4)甲醇固定 10min。
(5)滴加待检血清、阳性血清、阴性血清(童贞 AB 型血清)，37℃ 湿盒30min。
(6)PBS洗 3次，每次浸洗 3min。
(7)滴加羊抗人 IgG-FITC，37℃ 湿盒 30min。
(8)PBS洗 3次后，荧光镜下观察结果。
【结果】
荧光镜下观察，精子头部、中段出现荧光为抗精子抗体阳性
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