怎样做半透明带精子结合试验

2012-04-01 09:30:01

精子的授精能力依靠于精子的结构、精子的活动力和获能的质量。精子顶体成分的开释或者结合并穿透卵子的透明带是获能完成的标志。精子在透明带部位的功能或许是对于精子授精能力的终极检验。由于透明带提供了精子与卵子最初的相互作用所必须的部位。半透明带精子结合试验(hemizona assay，HZA)即专用于检查精子与卵子的透明带表面紧密结合的试验。若无这种紧密结合，则授精过程中所有步骤均不能进行。

最好是利用活的受精的人卵进行这项测定。然而出于伦理方面的考虑，而且人卵甚难获得，从而使 HZA 的测定受到了限制。以致近年来这项检验人类精子与卵子相互作用测定被分解成两个试验：其一是往透明带仓鼠卵穿透试验;其二是完好的非存活人卵穿透试验。最近衍生出很多的精子功能测定方法。包括：严格的形态学评估，肌酐磷酸激酶水平测定、低渗膨胀试验以及精子 ATP 含量测定等。然而精卵结合的生物测定可能是最有效的，由于这类测定旨在评估受精过程中所必须的精子功能。

一、HZA 的目的与临床应用

建立 HZA 的目的是利用配对的人类非存活半透明带，对于精子结合能力的一致性，通过比较受试患者的精子与已知有生养力的对照者的精子，对其相对结合率来评估精子授精能力。由于应用来自同一卵子的透明带能很好解决不同卵子的透明带之间结合能力的变异。以往固然 HZA 在筛选接受体外受精(IVF)规划的对象时多用于检测男性因素所致的不育者，但目前国外一些机构对于要求治疗的不孕男性以及输精管吻合术后的对象，亦进行HZA 测定，对于经过治疗的不孕男性、避孕的对象以及接受化疗的患者，亦可应用 HZA 检测其精子功能的变化。

二、HZA 方法的建立及其有效性

关于 HZA 方法的可行性，已有若干文献作了报道。现已证实：① 应用显微操纵装置能很轻易地将透明带切成二等分;② 无论是取自卵巢还是取自未成熟的 IVF 卵子，均不影响精子与其结合;③ 精子对于半透明带外表面的紧密结合与对于完好的透明带的结合能力是相同的;④ 精子对于一分为二的配对半透明带表面的紧密结合亦是相同的。

有关精子结合于半透明带(来源于证实有生养能力的供体)的动力学研究显示，两者的紧密结合在共培养 1h以内即已启动。

重要的是精子结合在证实有生养能力的男子通常于 4h左右达高峰，因而 HZA 采用 4h培养期。而且对于生养能力较差的男子，其精子结合的动力学曲线形态显示与正常男子曲线相仿，也在 4h左右达高峰。有关研究已证实对于一分为二的配对半透明带，精子结合的动力学曲线在其培养的 8。5h内无论形态还是峰值均非常接近。

已有学者在 3项不同的研究中，应用已接受 IVF 治疗的男子的精子检查了 HZA 结果的临床意义。鉴于在 10个实验中，每次均应用配对的半透明带进行 HZA，与来自接受 IVF 治疗而尚未获得体外受精的男性相比，有生养力男性的精子能更有效地结合半透明带(分别为34。0±8。0和 5。9±2。0)。因此半透明带精子结合试验指数(hemizonaassayindex，HZAI)的计算公式应为：

HZAI=(结合于半透明带的受检精子数 /结合于半透明带的对照精子数)×100

在另一项研究中，进行 HZA 操纵的技术员，并不知道对象的病史、病因和 IVF 结果。36例对象中，畸型精子是其惟一的异常结果，其中 27例能使妻子至少一个卵子受精，其紧密结合半透明带均匀精子数为 36。1±7。0;其余 9例对象在接受 IVF 治疗过程中并未发生受精，其紧密结合半透明带均匀精子数为 10。4±4。0( P <0。05)。

最初的 HZA 是应用冻-融的未成熟卵进行的。这些卵子几乎均是在卵巢活检时获得的，所有卵子均在 -70℃ 条件贮存于 2mol/L 二甲亚砜(dimethylsulphoxide，DMSO)中。有关的实验显示透明带贮存于盐溶液，也能反映相同的精子结合能力。无论是低温下贮存于DMSO，还是室温下贮存在高浓度盐溶液中，这些卵子对于测定相同的精液标本均能提供具有相同结合动力学和相等能力的半透明带。鉴于透明带贮存于缓冲盐溶液中可使操纵简单、运送方便，更易为某些实验室所采用。

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